Órgãos Financiadores:

FUND COORD DE APERFEICOAMENTO DE PESSOAL DE NIVEL SUP – CAPES
ORGANIZACAO MOGIANA DE EDUCACAO E CULTURA SOCIEDADE SIMPLES LIMITADA – OMEC
CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLOGICO – CNPQ
FUNDACAO DE AMPARO A PESQUISA DO ESTADO DE SAO PAULO – FAPESP

Resumo:

O melanoma é formado a partir da transformação maligna dos melanócitos e apesar da baixa incidência na população, é considerado o tipo de câncer de pele mais grave, devido a facilidade deste tipo de câncer causar metástases. Por outro lado, o câncer de mama é um dos tipos mais prevalentes de câncer no mundo. Peptídeos derivados do domínio de ligação ao DNA (domínio POU) do fator de transcrição BRN2 tem mostrado efeitos importantes em células de melanoma. Alguns desses peptídeos foram testados em células de melanoma e mostraram efeitos como: indução de morte celular, indução de parada no ciclo celular, bem como, inibição da migração, invasão e diminuição de nódulos pulmonares em animais tratados. Além disso, em experimentos de microscopia confocal, observamos que os peptídeos biotinilados se ligam no núcleo e na actina das células tratadas, entretanto, não se sabe ainda se a ligação ao DNA é no domínio de ligação ao DNA da proteína BRN2, se é em um outra sequência inespecífica ou se os peptídeos se ligam em proteínas nucleares. Alguns compostos naturais também já foram testados em nosso laboratório e tem mostrado efeitos antitumorais importantes, como indução de apoptose e autofagia e indução de espécies reativas de oxigênio em células de melanoma e efeitos antitumorais in vivo. O objetivo deste projeto é determinar se os peptídeos interferem na regulação gênica de genes regulados por BRN2 utilizando técnicas de Western Blotting, PCR em tempo real e RNAseq. Iremos também determinar os mecanismos de internalização dos peptídeos utilizando inibidores de internalização e microscopia confocal e determinar os ligantes celulares dos peptídeos derivados de BRN2 biotinilados, utilizando Eletrophoretic Mobility Shift Assay para ver a ligação no DNA e uma coluna de estreptavidina-agarose e espectrometria de massas para ver a ligação em actina. Além disso, iremos também estudar os peptídeos e compostos naturais em modelo de câncer de mama, utilizando linhagem de câncer de mama murino e humano para experimentos in vitro para investigarmos o tipo de morte celular induzido pelos peptídeos, mecanismo de ação nessas células, investigarmos inibição de migração e invasão e interferência no ciclo celular. Além disso, iremos testar esses compostos usando modelo de câncer de mama in vivo. Estudos com novos compostos naturais ou sintéticos com atividade antitumoral in vitro e in vivo em câncer de mama e melanoma são importantes para o desenvolvimento de novos produtos para serem usados na terapêutica para o tratamento de câncer.

Produções Intelectuais Associadas: